Www Dot Com Dot Aidi

Www Dot Com Dot Aidi – Injeksi kepiting, obat Cina yang dipatenkan, banyak digunakan untuk mengobati kanker. Namun, efeknya dan kemungkinan mekanismenya pada karsinoma sel skuamosa esofagus (ESCC) belum dikarakterisasi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi mekanisme yang mendasari efek metastatik dari terapi ID. Untuk menguji efek dan mekanisme, sel EC9706 dan KYSE70 dipilih untuk percobaan in vitro. Efek metastatik injeksi ID diselidiki in vivo dalam model metastasis peritoneal tikus telanjang dan mekanisme dievaluasi dengan pewarnaan imunohistokimia. Uji proliferasi sel menunjukkan bahwa pengobatan dengan lebih dari 3 mg/ml Aidi selama 24 atau 48 jam secara signifikan menghambat proliferasi EC9706 (P).

Kanker esofagus adalah jenis kanker yang paling umum di seluruh dunia dan memiliki prognosis yang sangat buruk. Karsinoma sel skuamosa esofagus (ESCC) adalah jenis kanker esofagus patologis yang paling umum, terhitung 70% kasus (1). Insiden dan tingkat kematian ESCC sangat tinggi di negara-negara Asia dibandingkan dengan negara-negara Barat (2). Kombinasi terapi, termasuk pembedahan dan kemoterapi, adalah pendekatan utama untuk pengobatan ESCC (3, 4). Namun, prognosis kanker esofagus tetap buruk, dengan tingkat kelangsungan hidup lima tahun secara keseluruhan dilaporkan 15-25% (5). Metastasis tumor adalah penyebab utama kematian yang terkait dengan karsinoma sel skuamosa esofagus (6). Karena tidak adanya lapisan serosa dinding esofagus, infiltrasi langsung dan metastasis dapat terjadi pada tahap awal kanker esofagus (7). Telah dilaporkan bahwa 56% pasien menderita metastasis vaskular dan 32% pasien menderita metastasis limfatik selama invasi tumor jaringan submukosa (8). Gejala dan tanda awal kanker kerongkongan tidak mudah dibedakan; Namun, ketika diidentifikasi, penyakit ini biasanya berada pada tahap pertengahan hingga akhir patogenesis. Selanjutnya, metastasis jauh terjadi, menyebabkan prognosis yang buruk (4). Oleh karena itu, mekanisme invasi dan metastasis kanker esofagus menjadi fokus penelitian.

Www Dot Com Dot Aidi

Ekstrak Aidi, ginseng, Astragalus membranaceus, Acanthopanax dan Mylabris telah diteliti dan diproduksi secara melimpah untuk penggunaan klinis di Cina sejak 2002 (9). Injeksi ID telah banyak digunakan untuk mengobati beberapa jenis kanker, termasuk ESCC (10), kanker lambung (11), kanker hati primer (12), dan kanker kolorektal (13). Penelitian farmakologi modern telah menunjukkan bahwa terapi ID memberikan berbagai efek farmakologis, termasuk efek antitumor dan imunoregulasi. Komponen kimia Aidi diidentifikasi dengan kromatografi pada kolom gel Sephadex LH-20 dan data spektral kromatografi cair kinerja tinggi semi-preparatif fase terbalik; Sebanyak 22 senyawa diisolasi dan diidentifikasi (14). Hasil penelitian menunjukkan bahwa 6 senyawa diperoleh dari Astragalus membraceus, 12 senyawa dari ginseng dan 4 senyawa dari Acanthopanax. Evaluasi aktivitas farmakologi dan toksikologi dari sediaan senyawa masih berlangsung. Efek antitumor dari terapi Aidi termasuk induksi apoptosis, penghambatan proliferasi sel dan angiogenesis, dan mitigasi efek samping terkait kemoterapi (15, 16). Namun, efek terapeutik Aidi pada penghambatan metastasis ESCC tidak jelas.

Demeter Plant Dna Demethylase Induces Antiviral Response By Interferon Signalling In Animal Cells

Mekanisme invasi tumor dan metastasis sangat kompleks, termasuk lingkungan mikro hipoksia, angiogenesis, transformasi epitel-mesenkim (EMT), regulasi jaringan jalur pensinyalan ganda, dan sebagainya (17). Dalam penelitian ini, kami menggambarkan efek metastasis dari pengobatan Aidi di ESCC dan mengidentifikasi mekanisme potensial yang mendasari angiogenesis dan EMT dalam efek antimetastasis.

Garis sel ESCC manusia EC9706 dan KYSE70 (Bank Sel Akademi Ilmu Pengetahuan Cina, Institut Biologi Sel Shanghai, Shanghai, Cina) dikultur dalam media RPMI-1640 yang dilengkapi dengan 10% serum janin sapi (FBS; keduanya Gibco; Thermo Fisher Scientific). , Inc., Waltham, MA, USA) pada 37 °C dalam 5% CO2. Sel endotel vena umbilikalis manusia (HUVECs; Zhang Qiao Xin Zhou Biotech, Shanghai, China) dikultur dalam medium Eagle yang dimodifikasi Dulbecco glukosa tinggi (DMEM; Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) yang mengandung 20% ​​FCOBS. pada – 37 °C. °C. Aidi disiapkan pada konsentrasi awal 0,3 g/ml oleh Guizhou Yibai Pharmaceutical Co., Ltd. (Guizhou, China) dibeli dari 5-Fluorouracil (5-FU; 0,025 g/ml) dibeli dari Jin Yao Amino Acid Co., Ltd. (Tianjin, China). Obat-obatan diencerkan sampai konsentrasi yang diinginkan dengan media kultur sel tersebut di atas dalam lingkungan steril dan digunakan dalam percobaan in vitro; Obat yang diencerkan dengan saline steril digunakan dalam percobaan in vivo.

Sel (2 × 103) ditanam di piring 96-sumur selama 24 jam pada 37 ° C. Setelah menghilangkan media kultur asli, media kultur (100 l) yang mengandung 1,5, 3, 6, 12, 24, 48 atau 96 mg/ml Aidi ditambahkan. Sel dikultur pada suhu 37 ° C selama 24 atau 48 jam. 15 L 5 mg/mL MTT (Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, Jerman) ditambahkan dan diinkubasi selama 4 jam, diikuti oleh 180 L dimetil sulfoksida (Amresco, LLC, Solon, OH, USA). Setelah bentuk kristal biru-ungu benar-benar larut dengan pengocokan lembut selama 10 menit, absorbansi (A) terdeteksi pada 490 nm menggunakan pembaca lempeng mikro (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA). Tingkat pertumbuhan sel (%) ditentukan sebagai berikut: (kelompok yang diamati kelompok kontrol)/kelompok kontrol × 100.

Sebanyak 1 × 105 sel per sumur dikultur dalam pelat 6-sumur selama 24 jam pada 37 ° C. Sel kemudian diobati dengan 3, 6, atau 12 mg/ml Aidi, 32 mg/l 5-Fu, atau salah satu obat selama 24 jam pada 37 °C. Sel difoto menggunakan mikroskop cahaya (pembesaran, ×100, BX41; Olympus Corporation, Tokyo, Jepang).

Introducing The Delphi 2022 Fellows

Sebuah uji penyembuhan luka dilakukan untuk mendeteksi kecepatan migrasi. Sel dikultur dalam pelat 6-sumur selama 24 jam sebelum pengobatan dengan 6, 12, atau 24 mg/ml Aidi, 32 mg/l 5-Fu, atau obat apa pun selama 24 jam. Ujung pipet digunakan untuk menggores monolayer di setiap sumur. Sel-sel yang terlepas dihilangkan dengan mencuci dua kali dengan PBS. Sel-sel patuh yang tersisa dikultur dengan media lengkap selama 24 jam. Tingkat pengisian ruang, mewakili migrasi sel, dievaluasi menggunakan mikroskop medan terang (pembesaran, ×100, BX41; Olympus Corporation, Tokyo, Jepang). Kemampuan migrasi sel dihitung sebagai berikut: (lebar gores kelompok perlakuan – lebar gores kelompok kontrol) / lebar gores kelompok kontrol × 100.

Corning Matrigel Invasion Chambers (Corning Incorporated, Corning, NY, USA) digunakan untuk mendeteksi potensi invasif sel. Matrigel diencerkan 1:8 dengan medium RPMI-1640 dan digunakan untuk melapisi chamber atas. RPMI-1640 atau DMEM dengan 20% FBS (500 l) ditambahkan ke ruang bawah. Sel dikumpulkan setelah 24 jam perawatan sesuai dengan metode penyembuhan luka. Sel (5 × 104) dalam media RPMI-1640 bebas serum ditambahkan ke ruang atas dan dikultur selama 24 jam pada 37 ° C. Sel-sel yang menembus dihilangkan dengan usap lembut dengan bola kapas. Sel-sel yang menyerang difiksasi pada membran bawah dengan metanol 100% pada suhu kamar selama 15 menit, kemudian diwarnai dengan kristal violet 0,1% (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) pada suhu kamar selama 30 menit. Sel-sel yang menyusup dideteksi dengan mikroskop cahaya (pembesaran, ×100, BX53M; Olympus Corporation). Kapasitas invasif sel dihitung sebagai berikut (jumlah sel invasif pada kelompok perlakuan / jumlah sel invasif pada kelompok kontrol).

Dalam uji pembentukan tabung, sel HUVECs dan ESCC KYSE70 digunakan untuk menentukan tingkat angiogenesis dalam uji pembentukan mimikri vaskulogenik (VM). Matrigel yang diencerkan dengan medium bebas serum (1:1) diaplikasikan pada plat 96-sumur dengan volume 50 l/sumur dan diinkubasi pada suhu 37 °C selama 1 jam. Sebanyak 5 × 103 sel yang diobati dengan obat selama 24 jam disuspensikan dalam 50 l medium dan ditambahkan ke gel matriks dan diinkubasi selama 16 jam pada suhu 37 ° C dalam 5% CO2. Organisasi sel tiga dimensi diperiksa dan dicitrakan di bawah mikroskop terbalik (pembesaran, × 100).

Protein total dari sel EC9706 dan KYSE70 yang dirawat selama 24 jam diekstraksi dengan lisis (Beyotime Institute of Biotechnology, Haimen, China) dalam buffer pelarut yang mengandung 1 mmol/L fenilmetanasulfonil fluorida dan koktail protease inhibitor. , kemudian disentrifugasi pada 13.000 × g. pada suhu 4°C selama 15 menit. Konsentrasi protein ditentukan dengan menggunakan kit pengukuran protein asam bicinchoninic (Beyotime Institute of Biotechnology). Sebanyak 30 g protein per jalur dipisahkan oleh 10% SDS-PAGE dan dipindahkan ke membran polivinilidena fluorida. Membran diblokir dengan susu skim 5% pada suhu kamar selama 2 jam dan diinkubasi dengan antibodi primer terhadap cadherin-1 [Cell Signaling Technology (CST), Inc., Danvers, MA, USA; kucing Tidak. 3195; pengenceran, 1:1.000], cadherin-2 (CST, Inc.; cat. no. 13116; pengenceran, 1:1.000), vimentin (CST, Inc.; cat. no. 5741; pengenceran, 1:1000), dan faktor pertumbuhan endotel vaskular (VEGF-A; Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA; nomor katalog sc-152; pengenceran 1:500) semalaman pada suhu 4°C. -aktin (CST, Inc.; cat. no. 4970; pengenceran, 1:1.000) digunakan sebagai kontrol pemuatan. Setelah itu, antibodi anti-kelinci terkonjugasi lobak peroksidase (CST, Inc.; nomor katalog: 7074; pengenceran, 1:2.000) diterapkan pada suhu kamar selama 2 jam. Reagen deteksi chemiluminescence yang ditingkatkan (Thermo Fisher Scientific, Inc.) digunakan untuk memvisualisasikan sinyal imunoreaktif dengan sistem pencitraan gel (Bio-Rad).

Taobao Stock Illustrations

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *